分子病理技術(shù)服務(wù)-武漢科銳諾生物(在線咨詢(xún))

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武漢科銳諾生物科技有限公司

主營(yíng)業(yè)務(wù)：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
公司官網(wǎng)：www.whkrn.com
公司地址：湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號(hào)武漢國(guó)英種子A棟1樓

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點(diǎn)對(duì)點(diǎn)酵母雙雜交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)流程

1、誘餌蛋白毒性及自激1活檢測(cè)；

2、共轉(zhuǎn)化：分別將誘餌/捕獲質(zhì)粒（pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey）、陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒（pGBKT7-p53/pGADT7-T）、陰性對(duì)照質(zhì)粒（pGBKT7-Lam/pGADT7-T）分別共轉(zhuǎn)到Y(jié)2H Gold感受態(tài)細(xì)胞中，涂布于DDO平板培養(yǎng)；

3、點(diǎn)板驗(yàn)證：分別從平板上挑單克1隆稀釋10倍、100倍、1000倍，然后點(diǎn)板到TDO/X/A和QDO/X/A固體培養(yǎng)基進(jìn)行驗(yàn)證；

4、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與報(bào)告整理。

目前，我國(guó)已穩(wěn)定開(kāi)展的分子病理技術(shù)主要有顯色原位雜交、熒光原位雜交、PCR、熒光定量PCR、基因芯片和DNA測(cè)序技術(shù)。顯色原位雜交(chromogenicinsituhybridization，分子病理技術(shù)服務(wù)，CISH)技術(shù)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合產(chǎn)生的一門(mén)新興技術(shù)，是利用核酸分子單鏈間堿基互補(bǔ)的原理，將地1高辛或生物素標(biāo)記的外源核酸探針與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成雙鏈雜交分子，通過(guò)過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶的呈色反應(yīng)將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。根據(jù)探針?lè)N類(lèi)不同可分為DNA原位雜交和RNA原位雜交。

菌落的裂解及DNA結(jié)合于纖維素濾膜

（1）在一張保鮮膜上制作一個(gè)裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤(rùn)，讓濾膜留于原處2-3分鐘。

（2）用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復(fù)步驟（1）。

（3）吸干濾膜，將濾膜轉(zhuǎn)移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復(fù)一次該步驟。

（4）吸干濾膜，把它轉(zhuǎn)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉(zhuǎn)移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。

（5）將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時(shí)，固定DNA。

（6）將固定在膜上的DNA與32 P標(biāo)記的RNA進(jìn)行雜交。

分子病理技術(shù)服務(wù)-武漢科銳諾生物(圖)由武漢科銳諾生物科技有限公司提供。武漢科銳諾生物科技有限公司是湖北武漢 ,技術(shù)合作的見(jiàn)證者，多年來(lái)，公司貫徹執(zhí)行科學(xué)管理、創(chuàng)新發(fā)展、誠(chéng)實(shí)守信的方針，滿足客戶需求。在科銳諾領(lǐng)導(dǎo)攜全體員工熱情歡迎各界人士垂詢(xún)洽談，共創(chuàng)科銳諾更加美好的未來(lái)。

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