原位雜交的應(yīng)用范圍:
①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究;
②感1染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類乳1頭狀瘤1病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測;
③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測;
④基因在染色體上的定位;
⑤檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等;
⑥分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究,植物基因組原位雜交檢測服務(wù),如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,某些腫1瘤的診斷和生物學(xué)劑量測定等。
雜交結(jié)束后,去除雜交液,立即于室溫把濾膜放入大體積(300-500ml)的2×SSC和0.1% SDS溶液中,輕輕振搖5分鐘,并將濾膜至少翻轉(zhuǎn)一次。重復(fù)洗 一次,同時應(yīng)避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×SSC和0.1% SDS溶液洗膜兩次,每次1-1.5小時。此時已可進(jìn)行自顯影。如背景很高或?qū)嶒?yàn)要求嚴(yán)格的洗膜條件,可用300-500ml 0.2×SSC和0.1% SDS的溶液于68℃將濾膜浸泡60分鐘。
把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加X片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記??蓮牡灼先∠峦该骷?,通過對比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來鑒定陽性菌落。
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